微孔防水透氣膜在實驗分析中的應用
生物化學中很多實驗操作是把一種物質(zhì)和另一些物質(zhì)分開,最常用的有各種離心、電泳、層析等方法,而過濾法是一種古老但仍常用的分離技術(shù)。近十多年來發(fā)展了具有不同孔徑的微孔濾膜(0.1~10μm)和超過濾膜(約6~36nm),使過濾技術(shù)進人了亞細胞水平和分子水平,成為分子生物學工作者所采用的一種很簡單, 但又是十分重要的技術(shù)。
微孔濾膜可以根據(jù)它的孔徑大小不同而用于收集各種不同大小粒子,在進行細胞和細胞器的研究工作中,一般稱為絕對過濾。很多廠商供應的微孔濾膜就是根據(jù)生物樣品的大小制造的。在應用微孔濾膜技術(shù)的過程中,人們發(fā)現(xiàn)纖維素酯型微孔濾膜還具有一種特殊的吸附性質(zhì),這種吸附性質(zhì)使纖維素酯型微孔濾膜能結(jié)合一些生物高分子,而這些生物高分子實際上要比微孔濾膜的孔徑小得多,按絕對過濾的概念是不可能被微孔濾膜表面所截留住的。根據(jù)纖維素釀型微孔濾膜的這種吸附性質(zhì)建立了許多結(jié)合測定法,為現(xiàn)代生化分析技術(shù)做出了重要的貢獻,在分子生物學中應用極為廣泛。
EPTFE微孔濾膜過濾技術(shù)在生物化學方面的應用有下列幾個優(yōu)點。
①方法簡單,只要根據(jù)工作需要選擇種合適的微孔濾膜和采用一般的吸濾裝置,不需要其他的特殊儀器。
②使用方便,重復性好,全部操作(由收集樣品、分離、洗滌、干燥、直到最后鑒定和定量)在同一片均勻的微孔濾膜的表面上進行,這樣不存在丙樣品轉(zhuǎn)移而引起的損失導致結(jié)果偏低;也不會由于洗滌不充分導致結(jié)果偏高,所以重復性好。
③快速,收集有樣品的微孔濾膜可以很快地充分洗滌。而用經(jīng)典的離心法收集沉淀和洗滌,不但操作繁瑣而目要花費很多時間。特別應用多支管的過濾裝置可以同時進行幾十個樣品的過濾。 另一方面,單個樣品的收集和洗滌,能在幾秒鐘內(nèi)完成,適用于研究小分子快速轉(zhuǎn)移的動力學過程。
如前所述,各種孔徑的網(wǎng)狀型微孔濾膜是根據(jù)生物樣品的大小制造的。收集的沉淀粒子非常小,很多是肉眼看不到的。例如酵母菌用1. 2μm的微孔濾膜可以完全收集到,大腸桿菌則需用0.45μm的微孔濾膜來收集。從理論上講,這類收集是絕對收集,不像深層型濾紙過濾時可能漏過1%~2%,但實際上往往并不是那么絕對的,會受到很多因素影響,在除菌操作中更要注意這一點。